一、目 的：建立微生物限度检查法标准操作规程。

二、适用范围：适用于药品及其制造过程的微生物限度检查。

三、责 任：QC。

四、规 程：

1 微生物限度检查法系检查非规定**制剂及其原辅料受微生物污染程度的方法，检查项目包括**数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

2 实验用具：电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75%酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。 3 培养基。

3.1营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、胆盐乳糖发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基。

3.2培养基的管理、配制应符合检定菌、培养基管理规程、培养基配制规程。

4 试液：甲基红试液、40%氢氧化钾溶液、靛基质试液。

5 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液。

6 供试品溶液的制备：除另有规定外，取供试品10g或10ml化学膜剂为100cm（供试品如为固体，置研钵中研磨成细粉）,放入试管中，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀，作为1:10的供试液。

7对照用菌液：控制菌检查均应作相应已知菌的对照试验，对照菌株为大肠杆菌[CMCC

（B）44 102]。

取相应菌株的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内， 培养18～20小时，稀释至1:106。对照菌的加入量为50～100个。

8 检查法。

8.1除另有规定外,**培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。

8.2**、霉菌计数。

8.2.1平皿法。取均匀供试液，进一步稀释成1:10、1:102、1:103等适宜的稀释级。分别取连续三级10倍稀释的供试液各1ml，置直径约90mm的平皿中，再注入约45℃的培养基约15ml，混匀，等凝固后，倒置培养，每稀释级应作2～3个平皿。