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实验过程中的**、**、**
点击次数：1462  发布时间：2015-02-10
 
 
实验过程中的**、**、**（Desinfection 、Sterilization and Elimination of Bacteria）广泛存在于自然界中的微生物，是由核酸、蛋白质、脂类及多糖等有机大分子组成，其生长繁殖需要一定的环境条件，若改变其环境条件，使其发生代谢障碍或引起蛋白质的变形凝固，其生长受到抑制，甚至死亡。人类在预防病原微生物感染或者是需要在没有微生物的环境中工作时，通常采用物理化学或生物学方法进行**、**或抑制微生物的生长繁殖，以达到没有任何微生物的工作条件或切断传播途径、控制或消灭传染病的目的。
实验过程中的**、**、**【目的要求】
了解高压**法、紫外线**法、机械**的原理。
（一）高压蒸汽**法（示教）
高压蒸汽**器
1．构造：高压蒸汽**器是一个双层金属圆筒，外层坚厚，内层置需**的物品，两层之间盛水。其上方有金属厚盖，锅盖旁附有螺旋，借以将锅盖紧闭，使锅内蒸汽不能外溢，因而蒸汽压升高，温度也随之升高，它们之间的关系
如表5-1。
表5-1 不同蒸汽压力所达到的温度
蒸汽压力
温度（℃）
磅/吋2
公斤 / 厘米 2
5
0.35
108.8
8
0.56
113.0
10
0.70
115.6
15
1.05
121.3
20
1.40
126.2
25
1.75
130.4
30
2.10
134.6
 
 
高压蒸汽**器上装有排气阀，**活塞，以调节容器内蒸汽；有温度计和压力表，以示内部的蒸汽力和温度。
2．用法：向器内加水至规定量，放入被**物品，关上锅盖，并用螺旋将其与锅体紧扣，使之紧闭，器下加热，待器内温度上升到到5磅/吋2时打开排气阀，使器内冷空气排除，否则压力表所示之压力并非全部是蒸汽压力，**将不完全，器内温度与空气排除量的关系见表。
表5-2 高压蒸汽**器内温度与空气排除量的关系
压力表上所示
压力
（磅 / 平方吋）
能达到的温度（℃）
空气完全排除
空气 2/3 排除
空气 1/2 排除
空气 1/3 排除
空气全未排除
5
10
15
20
25
30
109
115
121
126
130
135
100
109
115
121
126
130
94
105
112
118
124
128
90
100
109
115
121
126
72
90
100
109
115
121
器内冷空气先由排气阀驱出，继则蒸汽出现，待有大量蒸汽逸出时（呈白色雾状气流）即可认为器内冷空气已排尽，关闭排气阀，此后器内压力逐渐升高，直至压力表指在所需的压力数字（如15磅/吋2或105Kg/cm2），调节**活塞，使器内压力在此数字上（下）能自动开放（关闭），以保持在此压力情况下维持20~30min，**时间到后，停止加热，待器内压力自行降至“0”，打开排气阀，使器内外压力完全一致，打开器盖取物。
高压蒸汽**法是*可靠的**方法，凡耐高热和潮湿的物件，如培养基、生理盐水、棉织品、传染性污物及废弃的**培养物等均可用本法**。

图5-1 手提式高压蒸汽**器
3．注意事项：必须加足规定水量，冷空气必须排尽，器内仍有高压时不得开排气阀、**阀，更不得松开螺旋开盖！根据物品的大小、性质，可适当增加**时间，以保持彻底**。
欲检查器内压力与温度是否符合，可用熔点与所需检查的温度相一致的化合物装入试管中，经减压熔封后，放入锅中一起**。**完毕，取出试管观察化合物是否熔化，即可判定。（一般用硫碘检查器内温度是否达到121℃）。
（二）紫外线**法（示教）
【原理】
波长为240~300nm的紫外线（ultraviolet ray,UV），包括日光中的紫外线，具有**作用，其中以260~266nm的紫外线**作用*强，这与DNA的吸光谱范围一致。其主要作用于DNA，使一条DNA链上两个相邻的胸腺嘧啶以共价键结合，形成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录，导致**的变异或死亡。紫外线不仅可杀灭DNA病毒，也可杀灭RNA病毒，如对SARS-COV有灭活作用。但紫外线穿透力较弱，一般的玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故一般用于手术室、传染病房、无菌实验室的空气**，或不耐热物品表面的**。
【材料】
1．大肠埃希菌肉汤16~24h培养物
2．琼脂平板二个、**的三角纸片、镊子
【方法】
1．用接种环蘸取大肠杆菌液在两个普通琼脂平板上，划一“+”形（每平板放两环），然后来回均匀涂布于整个平板表面。
2．将镊子通过火焰**后，夹取无菌的三角纸片一张，置于一琼脂平板中央，然后将平板打开，平放在距紫外线灯60~100cm处照射30min。
3．另一琼脂平板，在紫外线下用玻璃盖遮住平板的一半，同样照射30min。
4．照射完毕，用经火焰**后的镊子将纸片取出投入**缸中，盖好琼脂平板，放37℃温箱孵育24h观察结果。
【结果观察】
经培养后，观察记录结果并加分析。

图 5-2 紫外线**法
（三）滤过**法（示教）
是用物理阻留的方法除去液体或空气中的**，达到无菌的目的。滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于孔径的**等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温**的血清、***、培养基及空气等的**（但不能除去更小的病毒、支原体和某些**L型）。滤菌器种类很多，常用的是玻璃滤菌器和石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌器），本试验主要使用薄膜滤菌器：由硝基纤维素膜制成，依孔径大小分为多种规格，用于**的滤膜孔径为0.22μm。
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